电子联行根据既要有利于______，又要______；既要促进______，又要有利于______的要求，采用______、______、____

amH Ⅰ是5'突出端，Kpn Ⅰ则是突出的3'端(图Q25.7)。一位朋友建议用图Q25.7所示的寡聚核苷酸“片段”来进行连接。你并没有马上意识到这种方法可行，因为你想到的连接作用需要邻近的5'磷酸和3'羟基。虽然寡聚核苷酸分子被限制性内切核酸酶切割后会产生合适的末端，但是，合成的寡聚核苷酸的末端都是羟基。另外，虽然图Q25.7中接头是BamH Ⅰ-Kpn Ⅰ，但另一个接头却是Kpn Ⅰ-BamH Ⅰ。所以你怀疑相同的寡聚核苷酸是否能够适合这两种方式的连接。

图Q25.7用一种寡聚核苷酸片段连接不互补的限制性末端的图解

A．从细胞核中直接分离

B．染色体DNA的限制性内切酶酶解

C．反转录法

D．化学合成法

E．转染

苷酸差异的手段。这种分析方法要使用成对的寡聚核苷酸：其中一个被生物素标记，另一个具有放射性标记或荧光标记。图Q25.5(b)的一对寡聚核苷酸是为了检测镰状细胞白血病[图Q25.5(a)]而设计的。

在分析过程中，分别将不同个体的DNA在有DNA连接酶的存在下，两两配对进行寡聚核苷酸杂交。将生物素酰化的寡聚核苷酸结合到固相支持物的抗生物素链霉蛋白上，然后通过放射自显影检查杂交结果，如图Q25.5(c)所示。

图Q25.5寡聚核苷酸连接分析(a)β-珠蛋白基因的β镰状细胞(β^S)突变区的序列；(b)用于连接分忻的特异性的寡聚核苷酸；(c)β^Aβ_S之间单个碱基差异的检测分析，将生物素酰化的寡聚核苷酸收集在一个点，然后测定放射性

有一个寡聚核苷酸GpCpApGpApU，用RNase A水解和用Rnase T₁水解，产物分别是什么？

A．化学合成

B．DNA合成仪合成

C．从外周血细胞大量制备

D．基因克隆

E．聚合酶链反应

预案一般包括(但不局限于)以下部分？

能的直接检测。免疫染色表明，这种蛋白质定位于细胞核内，如同推测的一样，是一种转录因子。如果能够测出它所结合的DNA序列，就可以从现有的序列资料中查找已知基因启动子的天然位点，从而能够找到它所调节的基因。

有人建议用PCR扩增同该蛋白质结合的微量DNA，思路是(图Q25.8)：①合成一组长为26个碱基的随机序列的寡聚核苷酸混合体，在该序列的两侧各有一段25个碱基的序列作为PCR扩增的引物位点[图Q25.8(a)]；②把这些寡聚核苷酸加到含有转录因子的细胞粗提取物中，转录因子可以同含有结合位点的寡聚核苷酸结合；③用转录因子特异的抗体分离同转录因子结合的寡聚核苷酸；④用PCR扩增选择到的寡聚核苷酸进行序列分析。

图Q25.8 用随机的寡聚核苷酸选择和扩增特异的DNA序列(a)用于选择的原初随机序列的寡聚核苷酸，N代表任何一种核苷酸；EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ位点有利于选择DNA的克隆和序列分析。(b)同序列特异的DNA结合蛋白结合的寡聚核苷酸的选择和序列分析方案按照这一思路，用0.2ng单链随机序列的寡聚核苷酸开始了这项实验，这个寡聚核苷酸可以同一个PCR引物结合成部分双链，经过如图Q25.8(b)所示的四轮选择和复制后，用BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ消化分离到的DNA，将片段克隆到质粒中，并测定了10个独立的克隆(表Q25.1)，问：

表Q25.1 10个克隆的序列

注：画线的序列是PCR引物部位，两种序列都是从BamH Ⅰ末端开始，所有序列中结合位点的方向都是相同的。

A．错误

B．正确

A．RNA片段

B．DNA片段

C．RNA或DNAN片段

D．氨基酸片段一般