假设你需要将一段cDNA克隆到表达载体中并转化到大肠杆菌中。cDNA的两端和载体上均有BamHⅠ的酶切位点，你需要

用BamHⅠ切割eDNA和载体然后将它们连接在一起。下面是实验方法要求的具体步骤：a．用BamHⅠ处理载体DNA，然后用碱性磷酸酶去除5'端的磷酸基；b．用BamHⅠ处理cDNA，然后与步骤a中得到的载体DNA混合，加入DNA聚合酶，在适当的条件下使cDNA与载体连接；C．将步骤b的产物转入大肠杆菌感受态细胞中，培养后均匀涂在含有抗生素的琼脂培养皿上。

因为表达载体中含有抗性基因，能表达抵制抗生素的酶，所以只有含有载体的大肠杆菌才可以在含有抗生素的培养皿上生长，而未被转化的细菌则因受到抗生素的抑制而死掉。

你还参照实验手册做了下面四组对照：

对照一、在含有抗生素的培养皿上面涂布未被转化的(即不含有载体的)大肠杆菌感受态细胞(cells alone)。

对照二、用未被酶切的载体直接转化大肠杆菌感受态细胞，将产物涂布在含有抗生素的培养皿上面(vector alone)。

对照三、用BamHI酶切载体DNA后，不用碱性磷酸酶处理，不需要cDNA，直接加入DNA聚合酶，然后转化、涂板(Omit phosphatase，omit eDNA)。

对照四、除使用碱性磷酸酶外，其它与对照三相同(Omit cDNA)。

你一共做了三次实验，在第一次中所有的平板中都长出很多细菌。在第二次实验中所有的平板中都没有长细菌。在第三次实验中你得到了较好的结果，转化成功，具体克隆数见下表：

Preparation of Sample		NO.of Colonies
1	2	3
Control 1	Ceils alone	TMTC	0	0
Control 2	Uneut vector	TMTC	0	＞1000
Control 3	Omit phosphatase，omit cDNA	TMTC	0	435
Control 4	Omit CDNA	TMTC	0	25
Experimental sample		TMTC	0	34
TMTC=too many to count

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