用Maxam－Gilbert法测定单链DNA分子的核苷酸顺序。一份DNA样品进行四种不同处理。 （1)DNA与硫酸二甲酯反应，该

用Maxam-Gilbert法测定单链DNA分子的核苷酸顺序。一份DNA样品进行四种不同处理。

(1)DNA与硫酸二甲酯反应，该试剂使G和A都甲基化．但与G的反应快5倍。然后加热DNA，这样可除去甲基化的G和A残基。然后加碱，这时与甲基化碱基相连的糖从两侧的磷酸二酯键上断裂下来。

(2)如第1步中用硫酸二甲酯处理后将DNA放入稀酸溶液；这种处理使A优先脱落。在碱性条件下DNA的磷酸二酯键断裂。

(3)DNA与肼反应，再用吡啶处理。和第1和第2步的结果一样，磷酸二酯键发生断裂，但在T和C部位断裂频率相同。

(4)在2mol/LNaCl中进行第3步处理；这样可防止T处的断裂。这几步反应控制在每50个碱基中有一个发生甲基化或肼解反应。进行彻底水解反应。每组反应混合物由一组片段组成，它们的长度由特定碱基的位置决定。聚丙烯酰胺凝胶电泳可将每组混合物中的片段根据长度进行分离。通常DNA末端用³²P标记，这样凝胶中的片段可以用放射自显影定位。根据每个位置上带的密度可以从凝胶上读出顺序。须注意的是带的位置可确定碱基的部位，但是带的密度与断裂的几率有关。图2-3-49显示某样品的有关图谱。