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根据DNA复制的原理,你认为体外合成DNA至少需要哪些原料?

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第1题

Muller的PCR反应同大肠杆菌体内的DNA复制有哪些不同?你认为根本的差别在哪里?
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第2题

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第3题

转录复合物在DNA复制过程中是否仍能与DNA保持结合的关系。如果是这样,它将作为一种生物记忆,允许子细胞继承亲本细胞的基因表达模式。为了验证此想法,可在非洲瓜蛙(Xenopus)5SRNA基因上装配一个有活性的转录复合物,而Xenopus 5SRNA基因本身存在于质粒中,诱导它进行复制,然后在复制的基因上检测转录。这些步骤都可在体外实现。

  为了区别复制和未复制的模板,利用限制性核酸内切酶(DpnI,MboI和ScuBA),它们对于所识别序列GATC的甲基化的敏感性不同(如图13-3-52所示)。这个序列一旦在5SRNA的起始处出现,并且如果DNA在这个位点被切割,转录就不能发生。如果模板在野生型大肠杆菌复制,GATC序列的两条链中的A都被细菌中的Dam甲基化酶甲基化,完全甲基化DNA在体外的复制产生子代双螺旋,在第一轮复制中,只有一条链被甲基化,而在以后的复制循环中DNA就无甲基化。你的想法起始于完全甲基化DNA和诱导它在体外进行复制,然后分析用DpnI处理过的复制DNA上的转录。DpnI只切割未复制的完全甲基化DNA,但是它不能切割复制的DNA。因而它对转录有保护作用。

  

  为了验证方案是否起作用,可构建一个比正常的5SRNA基因略长的基因(大基因),它的RNA转录产物与正常5SRNA基因的转录产物很容易区别(如图13-3-52A所示)。然后将完全甲基化的大基因同甲基化或未甲基化的正常基因混合,在用DpnI、MboI和Sau3A消化前后分别检查它们的转录。限制性内切酶的专一性如图13-3-52A所示。为了验证复制对转录的影响,在完全甲基化的大基因上装配一个转录复合物,诱导复制,并在用限制性内切酶作用前后分别检查转录活性,结果如图13-3-52B所示。

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第4题

某生物兴趣小组的同学从资料上获知:二氯二乙胺能够阻止参与DNA复制的酶与DNA相互作用。他们推测:二氯二乙胺某生物兴趣小组的同学从资料上获知:二氯二乙胺能够阻止参与DNA复制的酶与DNA相互作用。他们推测:二氯二乙胺能抑制癌细胞的增殖,能作为一种癌症的化疗药物,并就此问题设计实验进行了探究。 实验材料:肝部长有肿瘤的小鼠,二氯二乙胺溶液,蒸馏水,生理盐水,含有全部营养物质的细胞培养液,显微镜,血球计数板,试管,吸管等。 ()另一位同学按照正确的方法进行实验,得到的结果如下表: ①.在该实验中,单因子变量是_________。 ②.据上表中实验结果,你能得出的结论是:____________________

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第5题

在冈崎提出DNA复制的不连续性观点以后,对于DNA复制过程中是两条链都是不连续复制,还是仅仅是后随链才是不连续复制,存在着很大争议。显然前导链的合成不需要不连续复制,但是许多研究者发现经脉冲标记的冈崎片段可以和亲代DNA的两条链杂交,这似乎意味着亲代DNA的两条链都可以作为冈崎片段的模板。试提出一种机制解释前导链的复制也可能产生冈崎片段,并设计一个实验证明你提出的机制。
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第6题

假定在30年以前你曾观察到细菌中的DNA复制受到灭菌灯(它发射紫外线)照射的抑制。显然损伤可能是由DNA直接吸收紫外线造成的,但是还有必要考虑某种其他分子吸收光后再损伤DNA的可能性。如果不使用现代的物理和化学技术,你可能用什么简单的光谱测定法来研究这个问题?
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